గడంగి ఇందిర
?????? ???????? ????? ????? ???????? ????????? ????????? ????? ???????? ??????? (???. ???????????????, ??????, ??????) ??????????, ????? ????? ????????????? ??????? ???????? ?????????????, ?????????, ??????? ?????????. ??????????? ???? ?????? 1917 ????? ??????????? ????????????? ???????????? ???????. ?????? ??????, ???? ??????? ?????????????? ??????????????? E. coli Nissle 1917?? ?????? ????????? ?????? ????, ????????? ?????????? ????????? ??????????????. Saccharomyces cerevisiae ????? ?????? ??????? ?????? ??????, ??????? pUC18???? ?????????????? ????? ???????? ?????? E. ???????? ????? ?????????. ???????????? E. coli Nissle 1917 ????? pUC18 ????? ???????? ????? PCR ???????? ?????? ???? ??????????????????? ?????? ????? ???????? ?????????? ????? ?????? 1.4 kb ???????? ??????????????. E. coli Nissle 1917?? ?????? ??????? ?????? ?????????, ??? ?????? ??????? ????????? ????????? ????????????? ?????? ?????? ????????? ??????????????. ???????????? E.coli Nissle 1917 ????? ?????? ????? ?????????? ?????? ????? ???? ????? pH ???????? ????? ?????????? ?????????? ??????? pH (??????, 5, 6, 7, 8, 9, 10) ???? ?????? ????????? ?????? ????????? ?????????????. ?????? ????? ??????? ?????? ?? PH ???? ???? PH ????? ????????? ????????????? ????? ???????? 6?? ????????. ????????? ??????? ????? ??????? ????????? ???? ???????? ?????????? YCp5O (Fig. 1). YCp5O pBR322 ????? ????????? ??????? ?????? ????? Ampr ????? Tetr ???? ?????????? ????? ???????. YCp5O ????? BamHI ???????????? ?????????? ?????????? ??????? ???????????. YCp5O ?????? ????? ???????????, ARSI ????? ?????, URA3?? ?????????? ????????? ????? ???????. ???????, ?????????? 1.8-kb ????? CEN4 ???????? ????? ???????, ??? ?????????? IV ????? ????????????? ????? ???????. ???? ???????????-?????? ???????????? ?????????????? ????????????, ???????? ???????? ???????????? ????? ?????????????????? ????????? ARS- ???? 2-, ???-?????? ???????? ???? ???????? ???????. ?????????? ???? ????????? ????? ???????????????? ??????? ????? ????? ????? ????? ??????????? ????? ????????? ?????? ????????????? ???????? ????????? ??? ????? ????. ????, ??????????, CDC8 ??????? ???? ????? ???????? ?????????? ?????? ???? ???? ??????? ???????. YCp5O ?????????? ????? 1?? ????? ????. ??????????? ????? ????????? ?????? ????????????? ??????, ???????? ????? ???? (21) ???????? ????? ????? ???? ?????? ??????? ??????????????. ???? ????? 1.7 x 104 ???????????? ????????? ????? ????????, ? ????????? ?????? ??? ????? ????????? ???????. CDC8-?????? ??????????? ????????. CLK6 ura3 cdc8?? ??????????? ????????????????, ????? YCp5O ???????? ???? ????? ????????????? DNA ???????? 103 URA+ ???????????????????? ??????????, ug, ?????? 0.04% ?????? ???? ????????? (37°C) ???? ????????? ???????. DNA ????? URA' CDC' ???????????????????? 4 ????? ???????????????????? ????? ??????????? ????????? ???????? ?????? E. ???????? ?????? ???????????. ?????????? DNA Ampr ?????????????????? ????? ????? ????????? ????? ?????? ???? ????????????????? ?????? ???????? ??????? ??????????????? ?????????? ?????? ??????????????????.?????? ???????????? ?????????? ??????? ??????? ?????? ????????? ????? ????????, ????????, Y ???? cdc8 ?????????????????? ????? ????????? ?????? ?????? ????? ??? ???????? SUP4 ??????? ????????????. ?????? ??????? ??????? ????? ?????? ?????? CDC8 ????????? ???? ??????????? ???????????????. ???? ????? ????????? ??????? ???? ???????? ???????????? ?????????? ????????? ??????? ???? ??????????; ??????????? ????????? ??-???????????? ???????????????? ??????????; ??? ???????????, ?????? ????????? 1. ?? ??????????? ????????????? cdc8 ??????????? ?????? ????? ???? ???? 750 bp ??????? ???????. ? ????? ?????????? ????? ???? ???????????? CDC8?? ????? ???? ??????????? ?????????? ???? ???????????? ????????????????????. ?????????? pSU4 ??????? ?????????? BamHI?? ?????? ????????? ????? SUP4 ????? CDC8 ?????????? ????? ???? ???? ?????????? YCp5O?? ???????? ????????. YCp5O BamHI ???????????????? ????????????? ????? ???????? ????????? ???????? DNA ????? ???????? ???? ???? ????????? ???????? ???????????? ?????????????????. T4 DNA ???????? ?????????? ?????? 15°C ???? ??? ?????? ????????? ???????????; ??????????? ???????? 1 ,ug ???????? DNA ????? zero.five ,ug pSU4 50 ,ul 66 mM Tris-hydrochloride (pH 7.6)-???? ??? mM MgCl2-10 mM ??????????????-1 mM ATP ???????. ??????? ??????????, YCp5O-S4 CDC8, BamHI ??????? ????? ???????? ?????????????? ????? ??????? ????????????? ?????????? ???????? ??????? ?????????? ???? ????? ???????????? ??????????? ????????. DNA? ????? ???? ????????, ? ???? ?????? CDC8 ????????? ????? ???? ?????? ????. ????, ??????? ??????? ??????? ????????? 27,000-??????? ?????????? ?????? ??????? ?????????. ??????????????? ??????? ????? ??????, ?????? CDC8 ?????????? ????????? ?????? ?????? ????? 34,000 ????? ????,000 (1) ???? ?????????? ??????????? ??????? ???????????. ??????? ???? CDC8 ???????? ????? ?? ???????? ???????????, ??? ???????? ???? ??????????????? ?????????-?????? ?????????? ?????? ??????? ??????? ???????. (???? ????? ????? ???? ?????????? ????? ???????? ?????? ???????? ???? ?????????? ????? ?????????? ?????? ?????? 370C ???? ??????????? ????? ??????, ???????? ????? ???? ?????????????? ?????????? ?????? ????? ???? ???????? ?????? ??????. ?????? ????????? ?????? ?????? URA+ ?????????? ???? ??????? ??????? ??????????? ????? ????? ? ????? ???????????? ???????? ?????????? ????????? ??????????? ?????? ?????????? ????? ????????? ???? ?????????? ?????.) ????? ???? ????? ?????????????? ????????????? ????? CDC8 ???????????? ????? ???? ???? ????? ??????? ???????? ??????? CDC8 ????? ?????????? ?????? ????? ? ????????? ????????? ?????????. ????? ?????? ????? ????? ???????? ?????? ???????. ?????? ?????????????? ????? ?????? ??????, AP ????? ??????????????? ????? ????? ??????? ????? ????????? UGC ?????? ?????? ????????????? Mjor ??????? ???????????? ??? ????????????.??? ?????????? ??????? ???????? UG ????? PG ???????? ???????????? ?????????? HOD. ??? ???????? ?????????? 15 ???? ?????? ???????? ?????????????, ????? ????? ?????????? ????????? ?????????????. gadangi.indira@gmail.com